martes, 11 de junio de 2013

Terapia génica en cáncer de mama

Para iniciar veamos que es y de que se trata la terapia génica:



El campo de la terapia génica se esta desarrollando con rapidez y amplió las posibilidades de tratamientos nuevos para el cáncer de mama.
La terapia génica en un comienzo fue prevista para la corrección de defectos genéticos hereditarios.

En la actualidad, hay distintas estrategias en terapia génica del cáncer, y se están realizando diversos ensayos clínicos para tratar diferentes tipos de cáncer: de mama, ovario, cabeza y cuello, pulmón, próstata, células renales, tumor cerebral, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crónica, linfomas, melanoma, mieloma múltiple y neuroblastoma.
A continuación se enumeran las diferentes estrategiasaplicadas en los ensayos clínicos realizados en terapia génica del cáncer:
– Aumentar la actividad antitumoral de células inmunes por medio de citoquinas (interleucinas, factores de necrosis tumoral, factores estimulantes de colonias o interferones).
– Aumentar la inmunogenicidad del tumor introduciendo antígenos foráneos (“vacunas tumorales”).
– Introducir un gen “suicida” o de sensibilidad aumentada a determinados fármacos. Se transduce el gen de una enzima (timidina cinasa) que activa selectivamente un profármaco (aciclovir).
– Bloquear la expresión de oncogenes mediante terapia antisentido.
– Introducir genes supresores de tumores (p53).
– Eliminación de las células tumorales mediante adenovirus oncolíticos.
– Transferencia de genes con efecto antiangiogénico, para inhibir la formación de vasos sanguíneos inducidos por el propio tumor.
– Introducir genes de resistencia a fármacos para reducir la toxicidad de la quimioterapia, particularmente sobre la médula ósea.

Bibliografía:


sábado, 8 de junio de 2013

Transgénicos

RATONES KNOCK-IN UN NUEVO MODELO PARA EL ESTUDIO DEL CÁNCER
Un knock-in génico es cuando la tecnología nos ha permitido la incorporación de una secuencia codificante al mensaje de un gen endógeno preseleccionado.

Este knock-in se lo puede realizar inactivando por interrupción el gen endógeno, produciendo una sustitución funcional del mismo por la secuencia codificante introducida; o respetándolo dando lugar a una adición génica.

El modelo knock-in de los ratones es muy útil para poder explorar el efecto que tienen las mutaciones específicas en los protooncogenes y/o genes supresores de tumores humanos.




Bibliografía:


sábado, 1 de junio de 2013

Construcción de una genoteca genómica de Pinus pinaster

Para poder conocer la estructura y organización de los genomas vegetales es necesario la clonación molecular de grandes fragmentos de secuencias genómicas para construir genotecas representativas.
La construcción de genotecas genómicas en cromosomas artificiales de bacterias es una de las herramientas mas utilizadas con este fin y la estrategia elegida en este trabajo; pero cuando se trabaja con especies que presentan genomas muy grandes como el pino, realizar este tipo de genotecas es laborioso y costoso.


En este tipo de genoteca la calidad del vector BAC es clave porque esta directamente relacionada con la eficacia de la transformación, en este caso se utilizo el vector pCUGIBAC1

Para la construcción de genoteca en grupos de clones es necesario utilizar varios procesos como:
incubación, suspensión de las células, ligación, resuspención, agitación, dilución, almacenamiento, extracción.

Los grupos de la genoteca se pueden rastrear por PCR utilizando como molde el ADN de los BAC de cada grupo y un par de cebadores que cubran una región del gen de interés.


Bibliografia:

sábado, 25 de mayo de 2013

ADN Recombinante en la Naturaleza


ALIMENTOS TRANSGÉNICOS

Los alimentos transgénicos son el más reciente fruto de la evolución tecnológica, aunque su conocimiento es incipiente e incompleto.

La ingeniería genética permite aislar desde un organismo la secuencia de interés de ADN y propagarlo en otro organismo, permitiendo obtener cantidades ilimitadas del producto codificado por dicho gen; a esto se denomina ADN recombinante, el cual se introduce en un microorganismo, que se cultiva y selecciona por su resistencia al antibiótico Al crecer se expresa el gen de interés y se introduce en el vegetal que se desea modificar, obteniéndose el producto transgénico.

El ADN recombinante ha sido muy utilizado en el campo de la medicina ya que ha permitido el desarrollo de importantes avances terapéuticos como por ejemplo la producción de insulina recombinante

En los alimentos transgénicos lo que se hace es buscar un gen que codifique una proteína; como por ejemplo una enzima que intervenga en la maduración de los frutos o en la producción de un compuesto inhibidor de multiplicación viral o de una característica estructural, que le confiera un aumento de contenido de nutrientes o una mayor tolerancia a un herbicida.



Bibliografía:


domingo, 19 de mayo de 2013

ADN recombinante en Cáncer de Mama

En terapia génica se usa tecnología del ADN recombinante para corregir un gen defectuoso y reemplazarlo, por el gen normal en forma permanente.

Este tipo de terapia puede ser:

- Somática: tiene validez para el individuo que la recibe y para la que existe gran consenso en su utilidad.
- Germinal: en la que no solo se modificará la información genética del individuo que la recibe, también de sus descendientes, ésta técnica tiene insospechada consecuencias por lo que despierta grandes reservas éticas y es censurada por la mayoría de científicos.

En la actualidad, se han llevando a cabo intentos clínicamente controlados de terapia génica humana.
El PGH es un proyecto de investigación que permite:
1) conocer la secuencia de todo el ADN humano
2) identificar los 30000 genes
3) conocer los genes involucrados en enfermedades genéticas, se destaca el cáncer de mama

El PGH tiene un impacto a nivel ético, legal y social. Un ejemplo emblemático es el gen que da susceptibilidad a cáncer de mama en algunas mujeres (oncogen BRACA); si una mujer se realiza el test para este gen, ¿tienen derecho las aseguradoras de salud y los empleadores conocer esta información antes de asegurar o emplear?
Finalmente el PGH contribuirá al desarrollo de nuevas drogas que permitan un tratamiento para cada paciente de acuerdo a su constitución genética.


Bibliografía:

martes, 14 de mayo de 2013

Mecanismos Genéticos Moleculares en Cáncer de Mama


Gracias a los últimos avances de la biología celular y molecular, los eventos cruciales de la carcinogénesis, progresión tumoral y la metástasis, están siendo analizados a nivel molecular.
Los laboratorios de Biología Molecular pueden brindar una importante información predictiva y ayudar a guiar las maniobras terapéuticas.
Entre estos nuevos podemos citar:

  • Amplificación y/o sobreexpresión de oncogenes
  • Secreción aumentada de factores de crecimiento
  • Índice de proliferación celular
  • Ploidía
  • Proteínas inducidas por los estrógenos
  • Proteínas del stress y Golpe de calor
  • Expresión de moléculas relacionadas con la metástasis
Un nuevo mecanismo genético molecular es la interacción clave entre BRCA1 y una proteína llamada RHAMM (codificada por el gen HMMR). Estas dos proteínas actúan en un mecanismo molecular antes desconocido, que regula la polaridad de las células epiteliales.
Los investigadores han demostrado que BRCA1 y RHAMM controlan el desarrollo normal de las células epiteliales de mama; si uno o ambos genes presentan mutaciones, el desarrollo normal de las células mamarias se altera de manera que aumenta el riesgo de que aparezca un tipo específico de tumor.




Bibliografía:

domingo, 12 de mayo de 2013

PCR en Cáncer de Mama



El objetivo de la PCR fue determinar la prevalencia de la mutación 185delAG.

Extracción de DNA de sangre periférica

Análisis de la mutación 185delAG: Para detectar la mutación 185delAG se utilizó la técnica de un mismatch PCRque es un método para la detección de una mutación puntual que no produce ni destruye un sitio de restricción; utiliza primers o cebadores para complementar la secuencia del ADN. El ADN amplificado mutante (a diferencia de la amplificación de ADN normal), cuando se digiere con endonucleasas apropiadas, electroforesis y se sondeó con un oligonucleótido marcado apropiado, revela un nuevo fragmento, menor restricción. Alternativamente, los primers o cebadores de PCR mismatch pueden ser diseñados para crear un nuevo sitio de restricción con el ADN normal, pero no con el ADN mutante.
La técnica usada genera dos bandas de 150pb y de 20pb para el alelo normal y solo una de 170pb para el alelo mutado, pues la enzima de restricción no corta el producto amplificado si esta presente la mutación.

La confirmación de la mutación 185delAG fue realizada por:
1. Amplificación por PCR del Exon 2 del Gen BRCA1 y Electroforesis en geles denaturantes de acrilamida-bisacrilamida
2. Hibridación alelo específica: consiste en los siguientes pasos:

  • Transferencia del DNA a soporte sólido mediante la técnica de Dot Blotting
  •  Marcación del oligonucleótido en el extremo 3'OH con digoxigenina-11-dd UTP
  •  Hibridación de filtros con el oligonucleótido marcado con digoxigenina-11-dd UTP
  •  Detección de la hibridación mediante quimioluminicencia
3. Secuenciación directa